مطالب اسلایدهای ابتدایی این پاورپوینت به شرح زیر است

تعداد اسلاید : 40 اسلاید

بررسی فرآیند کلن کردن ژن – کلونینگ – سلول های تراریخت مراحل کلن کردن ژن استخراج ژن مورد نظر
انتقال ژن مورد نظر به ناقل مناسب
انتقال ناقل نوترکیب به درون سلول میزبان
گزینش سلول های تراریخت شده
تکثیر سلول های تراریخت شده اهداف کلونینگ تولید انبوه یک پروتئین
مثال:انسولین انسانی هرمون رشد انسانی اینترفرون واکسن هپاتیت B اینترلوکین اریتروپوئیتین
2. دستکاری مسیر های بیولوژیک جهت اصلاح محصولات گیاهی وحیوانی
مثال:تولید گوجه فرنگی که دیتر نرم ورسیده میشود ابزار مورد نیاز برای کلونینگ انزیم های برشی وانزیم های اتصال دهنده

ناقلین کلونینگ انزیم های برشی این انزیمها اندونوکلئاز میباشند واز باکتری استخراج میشوند این انزیم ها در باکتری نقش دفاعی دارند نحوه نام گذاری این انزیم ها حرف اول: جنس
حرف دوم وسوم: گونه
حرف چهارم : نژاد
عدد: ترتیب کشف انزیم از منبع
مثال :ECOR1
مثال :HIND3
مثال :BamH1 خصوصیات انزیم های برشی کوفاکتور:Mg 2+
توالی های پالیندرومی را شناسایی وبرش میدهند
نحوه برش به دو صورت است:1)ایجاد انتهای چسبان 2)ایجاد انتهای صاف انزیم های اتصال دهنده این انزیم ها برای اتصال ژن خارجی به ناقل استفاده میشوند
دو نوع انزیم انتصالی داریم:
Ecoli.DNA ligase
T4 DNA ligase ناقلین کلونینگ ناقلین کلونیگ باید دارای ویزگی های زیر باشند:
Ori داشته باشند
دارای ژن نشانگر باشند
دارای مکان برشی باشند انواع ناقلین کلونینگ پلاسمید ها: PBR322 Puc pTi
باکتریوفاژ: M13 لامبدا
کاسمید
شاتل
کروموزو مصنوعی مخمر انواع پلاسمید بر حسب عملکرد: R پلاسمید
F پلاسمید
COL پلاسمید
پلاسمید Vir
پلاسمید deg انواع پلاسمیدهای کلونینگ Pbr322
اندازه:4.36kb
رپلیکان: colE1
ژن نشانگر: amp R / tet R
تعداد نسخه ها: 15 الی 20 نسخه توضیح نحوه گزینش سلول های تراریخت شده ژن مورد نظر را وارد TeT R میکنیم سپس به درون باکتری انتقال میدهیم
3نوع سلول خواهیم داشت:
سلول هایی که پلاسمید وارد انها نشده
سلول هایی که حاوی پلاسمید غیر نوترکیب میباشند
سلول هایی که حاوی پلاسمید نوترکیب میباشند سلول های دسته اول به امپی سیلین حساس میباشند و دسته دوم وسوم مقاوم به امپی سیلین می باشند بنابر این با اضافه کردن امپی سیلین سلول های دسته اول را حذف میکنیم سپس 2 محیط کشت تهیه میکنیم که یکی محتوی امپی سیلین ودیگری محتوی تترا سایکلین
در محیط کشت امپی سیلین هر2 گروه سلول رشد میکنند و در محیط کشت تترا سایکلین سلول های حاوی پلاسمید غیر نوترکیب رشد میکند
بامقایسه باکتریها در این دو محیط کشت باکتری های تراریخت راشناسایی میکنیم PUC پلاسمید کالیفرنیایی اندازه:2.7KB
رپلیکان: COL E1
ژن نشانگر:amp R / Lacz
تعداد نسخه ها:500-700 توضیح نحوه گزینش سلول های تراریخت ژن مورد نظر را وارد lacz میکنیم سپس وارد ECOLi میکنیم: 3 نوع سلول خواهیم داشت
سلول هایی که پلاسمید وارد انها نشده
سلول ها یی که حاوی پلاسمید غیر نوترکیب میباشد
سلول هایی که حاوی پلاسمید های نوترکیب میباشند به محیط کشت انتی بیوت